万博手机网页app版

联系方式

  • 周经理:18607290327
  • 叶经理:18607290326
  • Email:1758612610@qq.com
您当前的位置:首页 > 服务中心 > 制片技术

制片技术

冷冻切片

一、 恒温冷冻切片

将组织在恒温冷冻切片机里切片。冷冻腔内的温度一般设置为-18至-25℃,根据不同组织调节不同

的腔温,平时应将冷冻头放置于冷冻台上。冷冻切片机应长期处于恒温冷冻状态。

(1)、 当冰冻组织取好后,有速冻开关的机器可先将开关打开,再在冷冻头上放少量的OCT或羧甲基

纤维素(可用普通胶水代替),放上组织,速冻。

(2)、 待组织冻结后,将冷冻头装到切片机上

(3)、 粗切,修出切面细切几张,用毛笔刷去刀上组织片

(4)、 放下抗卷板,开始切片,切片厚度一般为5~6微米,切出的片子用载玻片贴附后立即放入甲醇

冰醋酸液(97ml甲醇+3ml冰醋酸)中固定,固定时间为10~20秒

(5)、 水洗

(6)、 苏木素1分钟

(7)、 水洗

(8)、 盐酸酒精分化1秒钟

(9)、 水洗

(10)、温水蓝化

(11)、伊红2~5秒钟

(12)、梯度酒精快速脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。

冰冻切片的注意事项:

(1) 速冻:是冰冻切片的关键,因为只有速冻才能减少组织内的冰晶,最好的办法是将速冻头迅速压

在组织上,冻好后就可切片。特别适用于较脆的组织。而含有脂肪较多的组织,最好放在液氮里处

理。在液氮里冷冻要注意不要冻过头,2~3秒钟就要拿出来看一下,只要有4/5的组织已经冻住就可

以了,待冷冻头拿出后刚好全部冻住,否则就会引起组织发脆,或冷冻头与组织分离。

(2)固定:切片后应立即放入甲醇冰醋酸中固定,不能等切片干后再固定,后者容易造成细胞退变。

固定液有很多种,根据我们的实践,认为甲醇作用快,收缩小,染色较清晰,是冰冻切片最理想的固

定液, 而每97ml加入冰醋酸3ml,会减少某些胶质、钙质较多的组织不容易掉片。

(3)包埋剂:可用普通胶水代替,但要加入适量的水(胶水与水的比例大约在2:1左右)。太稀了,

容易损伤切片刀;太稠了,粘在切片上不容易洗掉,影响切片的质量。

(4)冰冻用切片刀不仅要磨的快,而且要磨的直,否则切出的片子就不会平整,不能进入抗卷板。最好

能使用一次性刀片。

(5)如组织发脆,可等几分钟后再切,也可用手在组织上稍稍加温;如果用手去摸组织块,最好戴手

套,或用玻片间的纸夹在手与组织之间,以防感染。

(6)冷冻室的温度冬天一般设在-19℃左右,夏天设在-22℃左右。不同的组织,有不同的温度要求:肝

脏、甲状腺组织温度控制在-15℃左右,脂肪组织一般在-35℃以下。

(7) 冷冻切片机应长期处于恒温冷冻状态,经常的开关机器电源容易造成压缩机损伤。

二、半导体制冷切片

(1) 组织放置在半导体制(万博手机版官网登录)冷台上,加少量水,调好切片的厚度

(2) 接通循环流水后,再接通电源,在使用的全过程中不能中断流水,等电源关上后才能停水。并且

正负极不能接反,用整流电源控制温度。冷冻组织周围的水不能过多

(3) 待组织发硬到可切成厚薄一致的切片时,即可切片。切片厚度5~6微米,切片用毛笔展平后,立

即放入甲醇冰醋酸液中固定,固定时间为1分钟

(4) 苏木素1分钟

(5) 水洗

(6) 盐酸酒精分化1秒钟

(7) 水洗

(8) 温水蓝化

(9) 伊红2~5秒钟

(10) 梯度酒精快速脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。

三、二氧化碳冷冻切片

a) 先将组织放入加热的20%甲醛溶液中固定1~2分钟,水洗(也可将组织不经固定直接放在切片机的

冷冻台上)

b) 放在切片机的冷冻台上,加少量水,打开二氧化碳开关,此时有二氧化碳气体喷出,待组织出现

冷霜后,关闭二氧化碳

c) 切片,切片厚度6~8微米,将切出的片子放于水中舒展,用镊子将组织平铺于载玻片上(如未固定

组织的切片直接用载玻片粘贴,立即放入甲醇中固定2秒,然后进行染色,)

d) 加热烤片,烤片温度不宜超过60℃,更不能将组织烤焦。

e) 染色时将苏木素滴加在载玻片上,加热1分钟(60℃左右,不能将苏木素烧开,以防切片脱落)

f) 水洗

g) 盐酸酒精分化1秒钟

h) 水洗,温水蓝化

i) 伊红2~5秒钟

j) 梯度酒精快速脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。

万博手机 www.kulturtur.com

时  间:2020-09-27 17:54

点击数:0

上一篇:干涸组织的补救办法

下一篇:苏木精-伊红染色流程